Skip to content

zaleta dobrej potrawy

3 miesiące ago

567 words

Podjednostki syntazy ATP zostały zidentyfikowane na powierzchni komórek naczyniowych komórek śródbłonka (gdzie działają jako receptor dla angiostatyny) (22. 29), chcieliśmy przetestować możliwość, że mitochondrialny czynnik sprzęgający 6 jest podobnie eksprymowany na tych komórkach, skąd może zostać przelana do przestrzeni pozakomórkowej. W niniejszym badaniu zsyntetyzowaliśmy peptyd przy użyciu rozszczepialnej strategii białek fuzyjnych, ustanowiliśmy specyficzny system radioimmunologiczny (RIA) i zbadaliśmy rolę tego peptydu w regulacji ogólnoustrojowego ciśnienia krwi. Metody Zwierzęta. Męskie SHR i WKY w wieku 4 (odpowiednio n = 5) i 16 tygodni (odpowiednio n = 24) zakupiono od Charles River (Kanagawa, Japonia) i utrzymywano przy standardowej karmie dla szczurów i swobodnym dostępie do wody. Próbkę krwi tętniczej pobierano z aorty brzusznej do schłodzonych probówek zawierających EDTA 2Na (1 mg / ml). Próbki osocza oddzielono przez odwirowanie w 4 ° C i przechowywano w temperaturze ~ 80 ° C aż do użycia. Hodowlę komórkową. Komórki śródbłonka naczyniowego szczura (CRL-2222) hodowano w minimalnym niezbędnym medium Earle zawierającym 10% FBS w 37 ° C poniżej 5% CO2. W celu analizy akumulacji czynnika sprzęgającego 6 w kondycjonowanej pożywce, konfluentne komórki CRL-2222 hodowano na 100-milimetrowych szalkach Petriego w pozbawionym surowicy minimalnym ośrodku Earle a. Materiały. Komórki CRL-2222 zakupiono z American Type Culture Collection (Rockville, Maryland, USA). Enzymy restrykcyjne, ligaza DNA T4 i polimeraza Taq pochodziły z Takara-shuzo (Kyoto, Japonia). Enterokinazę otrzymano z Stratagene (La Jolla, Kalifornia, USA). Bradykinina i wszystkie inne odczynniki były najlepszej jakości od firmy Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri, USA). Kartridż Sep-Pak C18 zakupiono od Waters Chromatography Co. (Milford, Massachusetts, USA). Minicolumn krzemionki (BOND ELUT) pochodzi z Varian Inc. (Harbor City, Kalifornia, USA). Surowica kozła anty-króliczej IgG pochodziła z Japan Antibody Research Institute (Gunma, Japonia). Niespecyficzne anty-królicze IgG pochodziło z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. (West Grove, Pennsylvania, USA). Zestaw do przygotowania ImmunoPure Fab zakupiono od Pierce Chemical Co. (Rockford, Illinois, USA). Toxicolor Test pochodzi z Seikagaku Kogyo Ltd. (Tokio, Japonia). Trytowany 6-keto-PGF1. znacznik został zakupiony z New England Nuclear (Boston, Massachusetts, USA). 6-keto-PGF1. Ab i standard zostały dostarczone przez Ono Pharmaceutical Co. (Osaka, Japonia). Wszystkie inne odczynniki były najwyższej klasy dostępnej z Sigma Chemical Co. Synteza rekombinowanego czynnika sprzęgającego 6. Dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6 otrzymano z Escherichia coli, stosując rozszczepialną strategię białka fuzyjnego (30). Fragment cDNA kodujący dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6 zamplifikowano za pomocą PCR, stosując cDNA otrzymany z wątroby szczura jako matrycę i oligonukleotydy rCF6-01 5a -GAATTCGACGATGACGATAAGAATAA GGAACTTGATCCTGTACAG-3. i rCF6-02 5. -GTCGACTCAGGAC TGGGGTTTGTCGAG-3. z witryną SalI. Z rCF6E 5. -AGCACGCGT TCACATGACTGTCTCCCACT-3. i rCF6-02, miejsce EcoRI i sekwencję kodującą miejsce rozpoznawane przez enterokinazę (DDDDK) wprowadzono przed dojrzałym czynnikiem sprzęgania szczurzego 6. Fragment EcoRI-SalI o wielkości 0,3 kb kodujący sekwencję DDDDK i dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6. wstawiony do wektora ekspresyjnego E. coli pG139S w celu wytworzenia pG139SrCF6EK. Komórki E. coli JM109 transformowane pG139SrCF6EK hodowano w 37 ° C w podłożu SB (0,5% glicerolu, 2,4% ekstraktu drożdżowego, 1,2% tryptonu i 100 mM buforu fosforanu potasu o pH 7,5) zawierającego 10 .g / ml tetracykliny. Komórki zebrano przez odwirowanie, ponownie zawieszono w roztworze A (20 mM Tris-HCl przy pH 7,0, mM EDTA i 0,1% Triton X-100) i rozbito przez sonikację. Lizat odwirowano i pelet zawierający białko fuzyjne przemyto trzy razy roztworem A
[patrz też: olx strzelin, migotanie przedsionków leczenie, młodzieńcze idiopatyczne zapalenie stawów ]

0 thoughts on “zaleta dobrej potrawy”

  1. Ułożenie chorego na boku uchroni poszkodowanego przed zachłyśnięciem się własnymi wydzielinami.