Skip to content

zaleta dobrej potrawy

10 miesięcy ago

567 words

Podjednostki syntazy ATP zostały zidentyfikowane na powierzchni komórek naczyniowych komórek śródbłonka (gdzie działają jako receptor dla angiostatyny) (22. 29), chcieliśmy przetestować możliwość, że mitochondrialny czynnik sprzęgający 6 jest podobnie eksprymowany na tych komórkach, skąd może zostać przelana do przestrzeni pozakomórkowej. W niniejszym badaniu zsyntetyzowaliśmy peptyd przy użyciu rozszczepialnej strategii białek fuzyjnych, ustanowiliśmy specyficzny system radioimmunologiczny (RIA) i zbadaliśmy rolę tego peptydu w regulacji ogólnoustrojowego ciśnienia krwi. Metody Zwierzęta. Męskie SHR i WKY w wieku 4 (odpowiednio n = 5) i 16 tygodni (odpowiednio n = 24) zakupiono od Charles River (Kanagawa, Japonia) i utrzymywano przy standardowej karmie dla szczurów i swobodnym dostępie do wody. Próbkę krwi tętniczej pobierano z aorty brzusznej do schłodzonych probówek zawierających EDTA 2Na (1 mg / ml). Próbki osocza oddzielono przez odwirowanie w 4 ° C i przechowywano w temperaturze ~ 80 ° C aż do użycia. Hodowlę komórkową. Komórki śródbłonka naczyniowego szczura (CRL-2222) hodowano w minimalnym niezbędnym medium Earle zawierającym 10% FBS w 37 ° C poniżej 5% CO2. W celu analizy akumulacji czynnika sprzęgającego 6 w kondycjonowanej pożywce, konfluentne komórki CRL-2222 hodowano na 100-milimetrowych szalkach Petriego w pozbawionym surowicy minimalnym ośrodku Earle a. Materiały. Komórki CRL-2222 zakupiono z American Type Culture Collection (Rockville, Maryland, USA). Enzymy restrykcyjne, ligaza DNA T4 i polimeraza Taq pochodziły z Takara-shuzo (Kyoto, Japonia). Enterokinazę otrzymano z Stratagene (La Jolla, Kalifornia, USA). Bradykinina i wszystkie inne odczynniki były najlepszej jakości od firmy Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri, USA). Kartridż Sep-Pak C18 zakupiono od Waters Chromatography Co. (Milford, Massachusetts, USA). Minicolumn krzemionki (BOND ELUT) pochodzi z Varian Inc. (Harbor City, Kalifornia, USA). Surowica kozła anty-króliczej IgG pochodziła z Japan Antibody Research Institute (Gunma, Japonia). Niespecyficzne anty-królicze IgG pochodziło z Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc. (West Grove, Pennsylvania, USA). Zestaw do przygotowania ImmunoPure Fab zakupiono od Pierce Chemical Co. (Rockford, Illinois, USA). Toxicolor Test pochodzi z Seikagaku Kogyo Ltd. (Tokio, Japonia). Trytowany 6-keto-PGF1. znacznik został zakupiony z New England Nuclear (Boston, Massachusetts, USA). 6-keto-PGF1. Ab i standard zostały dostarczone przez Ono Pharmaceutical Co. (Osaka, Japonia). Wszystkie inne odczynniki były najwyższej klasy dostępnej z Sigma Chemical Co. Synteza rekombinowanego czynnika sprzęgającego 6. Dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6 otrzymano z Escherichia coli, stosując rozszczepialną strategię białka fuzyjnego (30). Fragment cDNA kodujący dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6 zamplifikowano za pomocą PCR, stosując cDNA otrzymany z wątroby szczura jako matrycę i oligonukleotydy rCF6-01 5a -GAATTCGACGATGACGATAAGAATAA GGAACTTGATCCTGTACAG-3. i rCF6-02 5. -GTCGACTCAGGAC TGGGGTTTGTCGAG-3. z witryną SalI. Z rCF6E 5. -AGCACGCGT TCACATGACTGTCTCCCACT-3. i rCF6-02, miejsce EcoRI i sekwencję kodującą miejsce rozpoznawane przez enterokinazę (DDDDK) wprowadzono przed dojrzałym czynnikiem sprzęgania szczurzego 6. Fragment EcoRI-SalI o wielkości 0,3 kb kodujący sekwencję DDDDK i dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6. wstawiony do wektora ekspresyjnego E. coli pG139S w celu wytworzenia pG139SrCF6EK. Komórki E. coli JM109 transformowane pG139SrCF6EK hodowano w 37 ° C w podłożu SB (0,5% glicerolu, 2,4% ekstraktu drożdżowego, 1,2% tryptonu i 100 mM buforu fosforanu potasu o pH 7,5) zawierającego 10 .g / ml tetracykliny. Komórki zebrano przez odwirowanie, ponownie zawieszono w roztworze A (20 mM Tris-HCl przy pH 7,0, mM EDTA i 0,1% Triton X-100) i rozbito przez sonikację. Lizat odwirowano i pelet zawierający białko fuzyjne przemyto trzy razy roztworem A
[patrz też: olx strzelin, migotanie przedsionków leczenie, młodzieńcze idiopatyczne zapalenie stawów ]

0 thoughts on “zaleta dobrej potrawy”

  1. Ułożenie chorego na boku uchroni poszkodowanego przed zachłyśnięciem się własnymi wydzielinami.