Skip to content

przychodnia miodowa płock laryngolog

4 miesiące ago

602 words

Co więcej, zahamowanie tej śmierci komórki znacząco hamuje rozwój tego zespołu. Eksperymenty te dostarczają bezpośrednich dowodów na to, że przewlekle podwyższone, ale niskie poziomy apoptozy mogą odgrywać rolę przyczynową w patogenezie niewydolności serca. Metody Materiały. Substancje chemiczne zakupiono od Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA), o ile nie zaznaczono inaczej. Myszy C57BL / 6 zostały dostarczone przez Taconic (Germantown, New York, USA) i Charles River Laboratories (Wilmington, Massachusetts, USA). Wszystkie eksperymentalne protokoły na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytut Studiów Zwierząt w College of Medicine Alberta Einsteina. Wytwarzanie myszy transgenicznych z wiązaniem FK. Kaspazy-8. Aby skonstruować transgen, najpierw subklonowano fragment NotI-EcoRI kodujący białko fuzyjne wiążące FK. Kaspaza-8 (FKBP. Kaspaza-8) (Figura 1a, dar VM Dixit, Genentech Inc., South San Francisco, Kalifornia, USA) (13) w pBluescript II KS + (Stratagene, La Jolla, Kalifornia, USA). Następnie subklonowano wyciszony fragment Hindlll tego konstruktu NotI w stępionych miejscach Hindlll klonu 26, który zawiera 4,4 kb mysiego łańcucha ciężkiego 5. Miozyny. sekwencja flankująca (dar J. Robbinsa, Children s Hospital, Cincinnati, Ohio, USA). Konstrukt transgenu uwolniono z sekwencji prokariotycznych przez trawienie BamHI i wstrzyknięto do przedjądrza zapłodnionej mysiej komórki jajowej uzyskanej z krycia FVB / N. C57BL / 6. Transgeniczne potomstwo następnie krzyżowano wstecznie na tle C57BL / 6. Zwierzęta otrzymane z czterech do ośmiu krzyżówek wstecznych wykorzystano do eksperymentów. Weterani WT byli zawsze wykorzystywani do kontroli. Zmutowany konstrukt transgenu C360A wytworzono przez mutagenezę ukierunkowaną na PCR (polimeraza DNA PfuTurbo, Stratagene) kodonu TGT do GCT w opisanym powyżej konstrukcie transgenu fuzyjnego FKBPa-8. Następnie dokonano resekwencji całego konstruktu, aby wykluczyć dodatkowe mutacje. Figura Ekspresja warunkowo czynnego allelu kaspazy-8 w sercach myszy transgenicznych. (a) Struktura białka transgenu i strategia jego aktywacji. M, sygnał mirystoilacji; FKBP, ludzki FKBP-12 (mutant pk); odpowiednio domeny p20 i p10, 20- i 10-kDa ludzkiej prokaspazy-8; HA, znacznik hemaglutyniny; FK1012, dimeryzer (patrz tekst). Pokazano Cysteinę 360, pozostałość niezbędną do aktywności kaspazy. (b) Analiza Southern biot strawionego EcoRI genomowego DNA z myszy WT i dwóch z dziesięciu wygenerowanych linii transgenicznych. Sonda, fragment mysiego łańcucha ciężkiego miozynowego łańcucha ciężkiego miozyny EcoRI-XbaI, zidentyfikowała fragment transgeniczny o wielkości 3,6 kb i fragment 2,5-kb endogennego łańcucha ciężkiego miozyny a-serca. (c) Analiza immunoblot przy użyciu przeciwciała przeciw ludzkiej kaspazie-8, wykazująca ekspresję białka transgenu w sercach linii o najwyższym ekspresji (linia 7) i najmniej wysoce ekspresyjnej (linia 169) w 3 tygodniu życia. Poziomy zmutowanego białka transgenowego w sercach myszy linii C360A są podobne do aktywności katalitycznie czynnego białka transgenowego w sercach myszy linii 7. Białko transgenowe nie było wykrywalne w badaniu innych narządów, jak można było oczekiwać w przypadku promotora ciężkiego łańcucha miozyny miocytów swoistych dla miocytów serca (nie pokazano). Dolna część błota poddawana była reakcji z przeciwciałem przeciwko mysiej tubulinie jako kontrolą obciążenia. Założyciele zostali zidentyfikowani na podstawie analizy Southerna ogonowego DNA strawionego EcoRI za pomocą sondy składającej się z fragmentu genomowego EcoRI-XbaI mysiego łańcucha ciężkiego łańcucha miozyny (miozyny) spinającego się od 5. region flankujący do intronu 1. Sonda ta zidentyfikowała fragment transgeniczny o wielkości 3,6 kb i fragment o długości 2,5 kb endogennego łańcucha ciężkiego miozyny a-serca. Kolejne generacje przeszukiwano za pomocą PCR z DNA stopy (14), stosując trzy-starterową reakcję, która identyfikowała produkt 324-bp z transgenu i produkt o 506-bp z endogennego genu ciężkiego łańcucha miozyny z mio-cyną.
[przypisy: mielopatia, niskorosłość, metatarsalgia ]

0 thoughts on “przychodnia miodowa płock laryngolog”

  1. [..] Oznaczono ponizsze tresci z artykulu oryginalnego: siłownie zewnętrzne producent[…]