Skip to content

Przeciwciała przeciwko ludzkiemu herpeswirusowi 8 u czarnoskórych południowoafrykańskich pacjentów z rakiem cd

2 miesiące ago

596 words

Próbki rozcieńczono 1: 100 w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem z 3% surowicą płodową. Rozcieńczoną surowicę dodano do utrwalonych komórek BCP-1 i inkubowano w 22 ° C przez 45 minut. Po płukaniu preparatów w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem z 3% surowicą płodową, królicze antyludzkie IgG znakowane izotiocyjanianem fluoresceiny (Dako, High Wycombe, Zjednoczone Królestwo), rozcieńczone 1:40 w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem z 3% płodowym cielakiem surowica, a szkiełka inkubowano w 22 ° C przez 20 minut. Preparaty następnie przemywano solą fizjologiczną buforowaną fosforanem bez surowicy płodowo-cielęcej i badano pod mikroskopem ultrafioletowym pod kątem charakterystyki jądrowego wzoru charakterystycznego dla przeciwciał przeciwko utajonemu antygenowi jądrowemu HHV-8 kodowanemu przez orf73.23,25-29 The HHV-8 -Negatywne linie komórkowe Raji i Daudi zostały użyte jako kontrole.
Rysunek 1. Rysunek 1. Natężenie światła fluorescencyjnego i rozkład miana przeciwciał przeciwko ludzkiemu herpeswirusowi 8 (HHV-8). Panel A pokazuje wyniki analizy komórek z sortowaniem komórek aktywowanych fluorescencyjnie u sześciu pacjentów. Intensywność sygnału fluorescencyjnego, określona za pomocą testu immunofluorescencyjnego, była niska u dwóch pacjentów, średnio w dwóch, a wysoka w dwóch. Panel B pokazuje rozkład miana przeciwciał anty-HHV-8 wśród tych z sygnałami o niskiej intensywności, tych z sygnałami o średniej intensywności i tych z sygnałami o wysokiej intensywności (bez sygnałów). Mediana miana w każdej grupie jest wskazywana przez poziomą linię. BCP-1 jest linią komórkową chłoniaka z komórek B (pierwotny chłoniak kosmówkowy), który jest dodatni dla HHV-8 i ujemny dla wirusa Epsteina-Barr.
Próbki surowicy, które były dodatnie pod względem przeciwciał przeciwko HHV-8 w teście immunofluorescencyjnym, były następnie oceniane jako niskie, średnie lub wysokie w zależności od intensywności sygnału fluorescencyjnego. Wyniki te dobrze korelowały z intensywnością fluorescencji mierzonej analizą sortowania komórek aktywowanych fluorescencyjnie (FACS). Figura 1A pokazuje wyniki analizy FACS dla sześciu osobników, z których dwie z próbek zostały ocenione jako niskie, dwie jako średnie, a dwie jako wysokie pod względem intensywności sygnału fluorescencyjnego. Powtarzalność tych wyników została zbadana, ilekroć była wystarczająca ilość surowicy do powtórnego testowania od pacjentów z mięsakiem Kaposiego (47 pacjentów) i od 94 dopasowanych kontroli bez mięsaka Kaposiego (dla każdej powtórnie testowanej próbki od pacjenta z mięsakiem Kaposiego, wybraliśmy próbki surowicy od 2 pacjentów; kontrolować osobników bez mięsaka Kaposiego, którzy mieli taki sam status HIV-1 i których wiek był jak najbliżej stanu pacjenta).
Próbki surowicy od tych 141 osobników przebadano w sposób zaślepiony testem immunofluorescencyjnym, a intensywność sygnału fluorescencyjnego ponownie oceniano (nieobecny, niski, średni lub wysoki). Wyniki powtórzonego testu były w pełni zgodne z wynikami pierwszego testu dla pacjentów z mięsakiem Kaposiego (40 było dodatnich zgodnie z testem immunofluorescencyjnym, a 7 było ujemnych), a w 94 procentach zgodnych dla tych, którzy nie posiadali Kaposiego. mięsak (około jedna trzecia była pozytywna zgodnie z testem immunofluorescencyjnym). Równie dobrze zgodziły się wyniki dotyczące intensywności sygnału: uzyskano dokładną zgodę dla 85 procent osób z mięsakiem Kaposiego i 90 procent osób bez mięsaka Kaposiego.
Aby zbadać zależność pomiędzy intensywnością fluorescencji a mianem przeciwciał przeciwko HHV-8, 141 próbek surowicy wybranych do powtórnego testowania również zbadano w sposób zaślepiony przy dwukrotnych rozcieńczeniach, rozpoczynając od 1: 100 dla przeciwciał przeciw HHV-8.30 Wynik dla intensywności sygnału fluorescencyjnego był silnie powiązany z mianem przeciwciał – mediana miana wynosiła 1: 200 dla niskiej intensywności sygnału, 1: 51 200 dla średniego natężenia sygnału i 1: 204 800 dla wysokiej intensywności sygnału (P <0,001) (Figura 1B) .
Badanie na obecność wirusa HIV-1 przeprowadzono w Departamencie Serologii Południowoafrykańskiego Instytutu Badań Medycznych w Johannesburgu
[przypisy: dekstran, ambroksol, buprenorfina ]
[patrz też: mielopatia, mielopatia szyjna, mięsak kości ]

0 thoughts on “Przeciwciała przeciwko ludzkiemu herpeswirusowi 8 u czarnoskórych południowoafrykańskich pacjentów z rakiem cd”