Skip to content

protetyka kłodzko

4 miesiące ago

601 words

Na etapach hiperpolaryzacji w potencjale błony (~ 40 mV do ~ 120 mV przez 5 sekund), pośredniczyły kanały HCN4-573X, takie jak kanały typu dzikiego HCN4, prądy aktywowane hiperpolaryzacją z typowymi cechami If (17, 18) (Figura 4). Kinetyka aktywacji prądów HCN4 i HCN4-573X nie różniła się istotnie i była rozsądnie dopasowana do pojedynczej funkcji wykładniczej (. 110 mV = 2377. 546 ms [n = 11] w porównaniu do 2028. 433 ms [n = 12]) (tabela 3). Zgodnie z poprzednim raportem (17), kanały HCN4 nie osiągnęły stanu ustalonego podczas 5-sekundowego protokołu aktywacji (rysunek 4a). Jednak względne otwarte prawdopodobieństwa kanałów HCN4 i HCN4-573X pobranych z chwilowych zewnętrznych prądów końcowych zostały rzetelnie opisane za pomocą funkcji Boltzmanna. Potencjały punktów środkowych (V1 / 2) kanałów HCN4 i HCN4-573X były bardzo podobne (HCN4, A 89,6 . 1,3 mV [n = 11], HCN4-573X, 88,7.7 1,2 mV [n = 11]; P = 0,61 ) dla 5-sekundowego protokołu hiperpolaryzacji (Figura 4 i Tabela 3). Z powodu powolnej kinetyki aktywacji kanałów HCN, V1 / 2 silnie zależało od czasu trwania testu. Dwusekundowe impulsy testowe dały wartości V1 / 2 wynoszące. 107,0. 2,0 mV (n = 7) dla HCN4 versus. 110,2. 1,2 mV (n = 10) dla HCN4-573X (P = 0,21). Impulsy testowe trwające 15 sekund dały wartości V1 / 2 wynoszące. 70,2. 2,2 mV (n = 7) dla HCN4 versus A 76,0. 0,8 mV (n = 8) dla HCN4-573X (P = 0,043) (Figura 4). Tak więc, dla długich protokołów aktywacji, punkt środkowy aktywacji kanałów HCN4-573X był w przybliżeniu o 6 mV bardziej ujemny niż kanałów typu dzikiego. Tabela 3 Charakterystyka elektrofizjologiczna kanałów typu dzikiego, zmutowanych i koekspresyjnych HCN4 Kinetyka dezaktywacji kanałów HCN4 wykazywała sigmoidalny przebieg czasowy. Przeciwnie, kinetyka dezaktywacji kanałów HCN4-573X była wykładnicza i dlatego bardziej przypominała kinety HCN1 i HCN2 niż HCN4. Cechą charakterystyczną kanałów HCN jest ich regulacja za pomocą cyklicznych nukleotydów. Ponieważ kanały HCN4-573X nie posiadały C-końcowego cNBD, badaliśmy wpływ zwiększonych poziomów cAMP na prądy pośredniczone przez HCN4. Zastosowano niehydrolizowalny analog cAMP-8-Br-cAMP, aby ocenić czułość kanałów HCN4 na wewnątrzkomórkowe poziomy cAMP i porównać komórki traktowane cAMP komórkami w warunkach kontrolnych. Po wewnątrzkomórkowym podaniu 8-Br-cAMP, punkt środkowy aktywacji prądów HCN4 przesunięto o około 15 mV w kierunku bardziej zdepolaryzowanych potencjałów błony (V1 / 2 = A 74,2 . 1,2 mV [n = 7]) (Figura 5, b i c) i Tabela 3). W przeciwieństwie do tego zależność napięciowa aktywacji prądowej HCN4-573X nie została znacząco zmieniona przez zastosowanie 8-Br-cAMP (V1 / 2 plus 8-Br-cAMP = 85,7-9, 1,9 mV [n = 8]) (Figura 5, c oraz d, i Tabela 3). Wyniki ekspresji in vitro sugerują, że pacjent indeksu może wyrażać zmutowane kanały If, które mają zmienioną wrażliwość na zmiany wewnątrzkomórkowych stężeń cAMP. Ponieważ mutacja 1631delC w genie HCN4 indeksu pacjenta była heterozygotyczna, symulowaliśmy także stan heterozygotyczny przez koekspresję podjednostek HCN4 i HCN4-573X. W celu uzyskania niezawodnej koekspresji podtypów typu dzikiego i zmutowanych, wytworzono bicistronowy plazmid ekspresyjny, który zawierał pełnej długości dziki i zmutowany HCN4 (Figura 6a). Ponadto, ekspresja EGFP była sprzężona z ekspresją HCN4 typu dzikiego przez element IRES, który umożliwił selekcję transfekowanych komórek (patrz Metody). Ponieważ ekspresje HCN4-IRES-EGFP i HCN4-573X były napędzane przez różne promotory (Figura 6a), badaliśmy względne ilości transkryptu w przejściowo transfekowanych komórkach COS-7 za pomocą RT-PCR. Wykorzystaliśmy miejsce restrykcyjne EciI, które jest obecne tylko w zmutowanych transkryptach, w celu rozróżnienia między produktami PCR typu dzikiego i zmutowanymi (patrz Figura 2c)
[podobne: mefedron cena, paweł gutral, młodzieńcze idiopatyczne zapalenie stawów ]

0 thoughts on “protetyka kłodzko”