Skip to content

protetyczne usługi łódź

4 miesiące ago

558 words

Białko fuzyjne rozpuszczono w 10 M roztworze mocznika i rozcieńczono do 3,5 M roztworu mocznika (20 mM Tris-HCl przy pH 8,0, 50 mM NaCl i 2 mM CaCI2). Enterokinazę dodano do roztworu przy stosunku enzym-substrat wynoszącym 1: 1200 (wag./wag.), Który następnie inkubowano przez 16 godzin w 22 ° C. Rozszczepiony dojrzały czynnik sprzęgający szczura 6 solubilizowano w 0,1% kwasie trifluorooctowym (TFA) i oczyszczono za pomocą HPLC stosując YMC A-302 (4,6 x 150 mm). Elucję prowadzono z liniowym gradientem 25,5% do 47,2% acetonitrylu w 0,1% TFA przy szybkości przepływu ml / minutę przez 54 minuty. Ostatecznie sekwencję aminokwasową i masę cząsteczkową tego peptydu sprawdzono za pomocą zautomatyzowanego sekwenatora peptydowego w fazie gazowej i spektrometrii masowej. Zanieczyszczenia endotoksynowe sprawdzono w następujący sposób: Rekombinowany czynnik sprzęgający 6 dodano do podwielokrotności testu Toxicolor (liofilizowana mieszanina lizatu amebocytów z Trachypleus tridentatus i substratu chromogennego, Boc-Leu-Gly-Arg-pNA) rozpuszczonego w buforze Tris-HCl pH 8,0 i mieszaninę inkubowano w 37 ° C przez 30 minut. Absorbancję zmierzono przy 545 nm po diazowaniu. Stężenie endotoksyn w końcowym preparacie rekombinowanego czynnika sprzęgającego 6 było mniejsze niż pg / ml. Synteza Ab dla szczurzego czynnika sprzęgającego 6. Syntetyczny roztwór czynnika sprzęgającego 6 (szczurzy roztwór Cys-58-76) zemulgowano taką samą objętością CFA i wstrzyknięto podskórnie królikom nowozelandzkim w wielu miejscach w regionie międzykręgowym. Frakcję Fab antysprzęgającego czynnika 6 Ab przygotowano stosując zestaw do przygotowania ImmunoPure Fab. W skrócie, czynnik sprzęgający 6 Ab inkubowano z papainą przez 5 godzin w 37 ° C. Solubilizowane fragmenty Fab i Fc i niestrawione IgG nałożono na kolumnę z białkiem A i przemyto buforem do wiązania ImmunoPure. Eluat zebrano i dializowano wobec PBS, pH 7,4, przez noc. Stężenie endotoksyny w czynniku anty-łączącym 6 Ab było mniejsze niż pg / ml. Procedury dla RIA czynnika sprzęgającego 6. Bufor inkubacyjny dla RIA był 0,05 M buforem fosforanu sodu (pH 7,4) zawierającym 0,5% BSA, 0,08 M NaCl, 0,025 M EDTA 2Na i 0,05% NaN3. Wszystkie procedury testowe przeprowadzono w 4 ° C. Standardowy rekombinowany czynnik sprzęgający 6 lub nieznana próbka (100 ul) inkubowano z rozcieńczalnikiem antyutouzyjnym czynnika antyutleniania (100 ul) przez 12 godzin, następnie dodano roztwór znacznika (18000. 20 000 cpm w 100. L) . Po inkubacji przez 24 godziny dodano surowicę z koziej surowicy anty-króliczej IgG zawierającą 10% glikolu polietylenowego 6000 (1000 ul) i króliczą IgG w stężeniu 200 ug / ml (100 ul). Po odstawieniu na godzinę probówki odwirowano przy 2000 g przez 30 minut w 4 ° C, a radioaktywność osadu mierzono licznikiem gamma. Surowica do czynnika sprzęgającego 6 wykryła peptyd o wysokim powinowactwie przy ostatecznym rozcieńczeniu 1: 2,500. Maksymalne zahamowanie wiązania radioaktywnego ligandu przez rekombinowany czynnik sprzęgający szczura 6 obserwowano przy 300 pg / probówkę. Odpowiednia ilość zimnego rekombinowanego czynnika sprzęgającego 6 dodanego do próbki RIA została dokładnie określona przez niniejszą OSR. Wskaźnik odzysku wynosił ponad 90%, gdy próbkę osocza traktowano wkładem Sep-Pak C-18. Współczynniki wariancji wewnątrz- i między-testowej wynosiły odpowiednio 8% i 10,2%. Przygotowanie próbek dla RIA czynnika sprzęgającego 6. Wkłady Sep-Pak C18 wstępnie zrównoważono solą fizjologiczną i załadowano albo osoczem (0,8 ml) zakwaszonym 200 ul HCl, albo pożywką hodowlaną. Po trzykrotnym przemyciu 5 ml wody zawierającej TFA, absorbowane materiały wymyto 2 ml 60% acetonitrylu zawierającego 0,1% TFA, zebrano i liofilizowano. Resztkowe materiały rozpuszczono w buforze RIA i klarowny roztwór przedłożono do RIA. Charakterystyka immunoreaktywnych substancji w osoczu
[przypisy: paweł gutral, młody zielony jęczmień gdzie kupić, niewydolność żylna ]

0 thoughts on “protetyczne usługi łódź”

  1. [..] Oznaczono ponizsze tresci z artykulu oryginalnego: makijaż permanentny szkolenia[…]