Skip to content

helikobakter w żołądku

2 miesiące ago

419 words

Lmna + / + i Lmna. /. zarodkowe fibroblasty myszy utrzymywano w DMEM (Invitrogen Corp., Carlsbad, California, USA) zawierającym 10% FCS (HyClone Laboratories, Logan, Utah, USA) i penicylinę / streptomycynę (Invitrogen Corp.). Eksperymenty z odkształceniami jądrowymi. Komórki wysiewano przy 900 komórkach / cm2 na błony silikonowe powleczone fibronektyną w DMEM uzupełnionym 10% FCS, a następnie głodzenie w surowicy przez 48 godzin w DMEM zawierającym suplement insuliny, transferyny i selenu (ITS) (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA). Poprzednim eksperymentom szczepu komórki inkubowano z barwnikiem jądrowym Hoechst 33342 (1 .g / ml, Molecular Probes Inc., Eugene, Oregon, USA) w DMEM plus ITS przez 20 minut. Membrany umieszczono na specjalnie wykonanym urządzeniu szczepiącym zamontowanym na mikroskopie Olympus IX-70 (Olympus America Inc., Melville, New York, USA), a odkształcenie dwuosiowe nakładano stopniowo. Szczepy błonowe i jądrowe obliczono na obrazach jasnego pola i fluorescencji, stosując specjalnie napisany algorytm analizy obrazu. Znormalizowany szczep jądrowy zdefiniowano jako stosunek odkształcenia jądrowego do odkształcenia błonowego, aby zrekompensować niewielkie zmiany w przyłożonym odkształceniu błony (zakres 17,4. 19,8%). Magnetyczna mikrorheologia perełek. Komórki umieszczano na płytkach z polistyrenu 35 mm (Corning-Costar Corp., Corning, New York, USA). Następnego dnia komórki inkubowano z kulkami paramagnetycznymi powleczonymi fibronektyną (Dynal Biotech Inc., Lake Success, New York, USA) przez 30 minut. Aby zminimalizować efekty jądrowe, do analizy wybrano tylko kulki przyczepione więcej niż 5 .m od jądra. Siłę sinusoidalną (amplitudę 0,6 nanonewtonów [nN], częstotliwość Hz, przesunięcie 0,6 nN) wprowadzono przez pułapkę magnetyczną, a przemieszczanie kulek monitorowano za pomocą aparatu cyfrowego (Roper Scientific Inc., San Diego, Kalifornia, USA). Amplitudę przemieszczenia obliczono za pomocą specjalnie opracowanych algorytmów MATLAB (The MathWorks Inc., Natick, Massachusetts, USA). W oddzielnych doświadczeniach, mniejsze (2 .m) kuleczki polistyrenowe powleczone fibronektyną (Bangs Laboratories Inc., Fishers, Indiana, USA) inkubowano razem z perełkami magnetycznymi przez godzinę, aby przylgnąć do powierzchni komórki. Komórki zawierające pojedyncze kulki magnetyczne i kilka kulek polistyrenowych poddano krótkiemu impulsowi siły (2,5 nN przez 3 sekundy). Korzystając z opracowanych na zamówienie algorytmów MATLAB, maksymalne indukowane przemieszczenia kulek magnetycznych i polistyrenowych obliczono i wyrażono w cylindrycznych współrzędnych (r, a) z kulką magnetyczną w punkcie początkowym i. = 0 dla kierunku siły. Indukowane pole szczepu można opisać za pomocą analitycznego modelu mechaniki komórkowej zaproponowanego przez Bausch i in. (20) wyrażające promieniową składową ur indukowanego przemieszczenia kulek w zależności od przyłożonej siły F, sztywności komórki. *, Charakterystycznego cięcia o promieniu 1, odległości od centrum magnetycznej kulki r i kąta biegunowego. : Równanie 1, w którym. 0 i <1 są zmodyfikowane funkcje Bessela drugiego rodzaju (porządek 0 i 1, odpowiednio) i zastosowanie. = [(1.) / 2] 1/2 .. Parametry. * I. zostały uzyskane przez dopasowanie równania do danych przemieszczenia kulek przy użyciu funkcji dopasowania krzywej GraphPad Prism 4.0 (GraphPad Software, San Diego, Kalifornia, USA) i przy założeniu. = 0,5 dla mediów nieściśliwych i promienia kontaktu kulki magnetycznej 2 .m. Kalibrację pułapki magnetycznej przeprowadzono jak opisano wcześniej (21). W skrócie, perełki magnetyczne zawieszone w lepkim roztworze monitorowano, przyciągając do pułapki magnetycznej działającej przy różnych prądach. Przyłożona siła jako funkcja prądu i odległość od pułapki magnetycznej została obliczona na podstawie Stokesa. prawo. Mikroiniekcja. Komórki umieszczono na szklanych naczyniach powleczonych fibronektyną (WillCo Wells BV, Amsterdam, Holandia) lub naczyniach silikonowych i inkubowano przez noc. [hasła pokrewne: olx strzelin, miód rzepakowy właściwości, mielopatia ]

0 thoughts on “helikobakter w żołądku”