Skip to content

bielański szpital warszawa

2 miesiące ago

562 words

Trawienie TaqI ujawniło dodatkowe miejsce homozygotyczne (Figura 2a). Sekwencjonowanie cDNA wykazało normalny wzór splicingu i ujawniło, oprócz delecji TT w nukleotydach 1302-1303, tylko jedną inną różnicę: GAT w kodonie 347 zastępującym AAT w opublikowanej sekwencji (X56088). Obserwowano to wcześniej jako rozbieżność sekwencji (30). Wykryliśmy ten polimorfizm D347N jako wariant egzonu 4 DGGE (dane nie pokazane). Figura Analiza genu CYP7A1. (a) Analiza DGGE eksonu 6 wykazująca mutację 1302-1303delTT. Przed DGGE próbki trawiono MboI. Ścieżki 1, 2, 3 i 5, nietknięte osoby; ścieżka 4, temat IV-19. Normalne pasma homoduplex i zmutowane, przesunięte w żelu paski homodupleksowe są zaznaczone. (b) Sekwencja części egzonu 6 pokazująca delecję TT, która powoduje przesunięcie ramki odczytu i przedwczesny kodon stop. (c) Diagrammatyczne przedstawienie struktury genu CYP7A1 za pomocą prawidłowych i przewidywanych zmutowanych białek. Figura 2 Wykrywanie mutacji CYP7A1. (a) cDNA CYP7A1 w pełnej długości trawiony wytwarzany przez RT-PCR z kontrolnego i pacjenta (IV-17) RNA wykazujący homozygotyczność dla dodatkowego miejsca TaqI. (b) Badanie przesiewowe najbliższej rodziny probanda. Homozygoty są reprezentowane przez wypełnione kwadraty i okręgi oraz heterozygoty przez wypełnione do połowy pola i kwadraty. Region kodujący eksonu 6 amplifikowano za pomocą PCR i trawiono TaqI. (Podwójne linie poziome wskazują na krągłe kojarzenie.) (C) Rodowód rodziny z niedoborem CYP7A1. Osoby II-1, II-4, III-3, III-5, III-6 i IV-11 są przedstawiane jako przewoźnicy obowiązkowi. * Nie można wywnioskować, który z tych dwóch podmiotów był początkowym przewoźnikiem. W celu przesiewania krewnych probanda stosowano trawienie TAqI eksonu 6 amplifikowanego przez PCR (Figura 2b). Brat (IV-17) i siostra (IV-15) są również homozygotyczni pod względem tego. Nokautu. mutacja. Rodzice probanda byli pierwszymi kuzynami (ryc. 2c). Zidentyfikowano trzy homozygoty i sześć heterozygot (rysunek 2c). Mutacja ta nie została wykryta u 1136 niepowiązanych osób: 720 pacjentów z hiperlipidemią i 416 niewyselekcjonowanych kontroli. Analiza DGGE DNA synów probandu (V-24 i V-25), obydwu obligatoryjnych heterozygot, wykazała spodziewane pasma normalne i zmutowane homoduplex (dane nie pokazane). Jednak wzorzec pasm heterodupleksu był inny, przewidując dodatkową zmianę DNA. Typowy polimorfizm został znaleziony w intronie 5 (IVS5-108T> C), który uwzględnił te obserwacje. Analiza transfekcji mutacji CYP7A1. Brak aktywności 7-hydroksylazy cholesterolu potwierdzono przez analizę transfekcyjną zmutowanego cDNA (Figura 3) w hodowanych komórkach HEK 293, stosując rutynowo stosowaną metodę (20, 31). W przeciwieństwie do produktu genu normalnego cDNA, nie wykryto wykrywalnej aktywności, gdy badano cDNA zawierający mutację 1302-1303delTT. Figura 3 Ekspresja CYP7A1 w hodowanych komórkach HEK 293 wykazujących brak cholesterolu 7-. aktywność hydroksylazy w mutancie L413fsX414. Komórki transfekowano normalnymi lub zmutowanymi plazmidami CYP7A1 (w pCDNA3.1) i inkubowano z [4-14C] -folesterolem. Sterole wyekstrahowane z pożywek komórkowych analizowano za pomocą TLC. Historia kliniczna pacjentów z niedoborem CYP7A1. Wybrano 55-letniego probanda (IV-19), kaukaskie pochodzenia angielskiego i celtyckiego, ponieważ jego hiperlipidemia była oporna na inhibitory reduktazy HMG-CoA. W wieku 48 lat miał ciężką dwunastniczą chorobę wieńcową, a następnie stwierdzono znaczną arteriosklerozę aortalną. Nietraktowany jego poziom cholesterolu w surowicy wynosił 419 mg / dl, a triglicerydy 919 mg / dl po 10-godzinnym poście (tabela 1). Jego wskaźnik masy ciała (BMI) wyniósł 26,5. Analiza jego frakcji LDL (1,006. 1,063 g / ml) wykazała stosunek cholesterolu do triglicerydów wynoszący 2,1 w porównaniu ze średnią wartością 4,55. 0,11 (. SE) z niewybranymi osobnikami kontrolnymi (n = 345)
[patrz też: młody jęczmień zielony, olx strzelin, miód rzepakowy właściwości ]

0 thoughts on “bielański szpital warszawa”